石榴是多年生的小乔木或落叶灌木，具有广泛的栽培适应性，温带和热带地区均有种植，温带地区冬季严寒而进入落叶休眠状态。在热带地区，气候适宜，石榴通常会在四季正常抽生枝叶，类似于没有休眠期的常绿果树。石榴通常4～7瓣花，颜色呈鲜红色、粉红色或白色。果实近球形，属浆果类，顶端有花萼裂片，果皮较厚，种子数量较多，每果种子数约有500～800粒，有酸、甜、酸甜多种口味，果实分早熟、中熟和晚熟，一般果熟期在8-11月。

组织培养作为一种成熟的生物育种育苗技术，在苹果、香蕉和樱桃等作物应用比较广泛，但目前在石榴种苗生产上刚刚应用。该技术是依据植物细胞具有全能性的原理，在无菌条件下，通过植物的一部分组织或细胞成功的“克隆”出一个完整的植物，以得到优良品质的新植株，组织培养育苗方式可以明显缩短植物的繁殖周期，提升苗木品质。如今，我国植物组织技术和工厂化育苗水平越来越成熟，本文主要介绍安徽中以农业科技有限公司在石榴组织培养过程中，摸索出来的石榴的茎尖脱毒种苗生产路径。

一、外植体的消毒

在石榴组织培养研究中，发现茎尖作为外植体培养效果最佳。将所采集的石榴嫩茎尖端置于烧杯中清水冲洗15 min，后用75%酒精洗涤30 s，再用无菌水冲洗两三次，除去表面灰尘及其他杂质。将冲洗后的材料置于超净工作台内，选取7.5% NaClO、0.1%HgCl2为消毒剂、最后使用灭菌水冲洗3～5次，放于接种盘中备用。

二、茎尖接种

在显微镜下，用解剖针将消毒后的外植体茎尖拨开，拨至只剩下叶原基生长点，其直径约为0.3～0.5 mm。再用手术刀切下茎尖生长点接种于配置好的培养基中。将接种好的外植体放于培养室中培养30 d，培养室条件为温度24～26 ℃，光照强度2000 Lx，相对湿度60%～70%，光照时间12 h/d。

三、增殖培养

茎尖接种后培养20 d后发出新芽，30 d后新芽长成细嫩的茎段。将无菌带芽茎段切成直径约0.5 cm的茎段，切除茎段底部发黑褐化的部分以及部分叶片后转接到增殖培养基上。增殖培养基为MS+0.75 mg/L NAA +1.0 mg/L 6-BA+35 g蔗糖+5.5 g琼脂。培养室条件为温度24～26 ℃，光照强度2000 Lx，相对湿度60%～70%，光照时间12 h/d。

四、生根培养

生根环节的接种操作方式同增殖培养环节，需要改变的是生根培养基配方，石榴生根培养基为WPS+1.0 mg/L NAA +1.0 mg/L 6-BA +35 g蔗糖+5.5 g琼脂。培养室条件为温度24～26 ℃，光照强度2000 LX，相对湿度60%～70%，光照时间12 h/d。

五、驯化移栽

将生根良好的瓶苗不打开瓶盖炼苗一两天后，再打开瓶盖炼苗3～5d。取出小苗，洗净根部残留培养基，移栽于草炭土：蛭石：珍珠岩2：1：1的基质中，浇透水，保持相对湿度70%～90%，适当遮荫，移栽至穴盘或营养钵缓苗一两个月，即可移栽至大田。

撰  稿 葛伟强（安徽蚌埠中以农业科技有限公司）

上线日期  2022年7月7日